微孔濾膜過濾法測定大腸杆菌的流程你知道嗎

濾膜法的大致流程：用濾膜過濾待測水樣→水樣中的細菌留在濾膜上→將濾膜轉移到EMB培養基上培養→統計菌落數目

1.濾膜與濾器的滅菌

（1）將濾膜放入燒杯中，加入蒸餾水，於沸水浴中煮沸滅菌三次，每次15分鍾。前二次煮沸後需換水洗滌2-3次，以除去殘留的溶劑。

（2）濾器滅菌，用點燃的酒精棉球火焰滅菌，也可用紗布和牛皮紙包裝好於121℃蒸汽下，高壓滅菌20分鍾

2.分離培養

（1）過濾水樣（海水、飲用水、深夜视频APP，水庫水及各種水源水），用滅菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣，使粗糙麵向上，貼放於已滅菌的濾器上，穩妥地固定好濾器，將水樣注入濾器內，加蓋，打開濾器閥門，在負0.4大氣壓下抽濾，水樣抽完後，再抽氣5秒鍾，關上濾器閥門，取下濾器。

（2）用滅菌攝於夾濾膜邊緣，移放在EMB培養基平板培養基上，使濾膜的截留細菌麵向上，另一麵緊貼培養基，兩者之間不得留有氣泡，重複以上的步驟，再接種一、二個平板，倒置培養皿於37℃下培養20-24小時。

（3）原理：大腸杆菌在含有伊紅美藍的固體培養基（EMB培養基）上長出的菌落呈黑色。

3.含量（汙染程度）的計算

1毫升水樣中的大腸杆菌群數等於濾膜上生長的大腸杆菌群的菌落平均數乘以稀釋倍數，最後除以樣品的毫升數，即得。

例如，無菌操作下將90ml無菌水加入到10ml待測水樣中，這樣就將待測水樣稀釋了10倍，將稀釋後的菌液通過濾膜法測得EMB培養基上的菌落數為45，黑色菌落為5，根據大腸杆菌鑒定的原理可知，黑色菌落為大腸杆菌，因此1升待測水樣中的大腸杆菌數目=5×（1000÷10）=500個。